Question

TILs疗法的治疗流程

第一步，我们得到病人的肿瘤组织块，其中混杂着体积较大的肿瘤细胞（浅蓝色）以及体积小而圆的T淋巴细胞（红色，绿色，深蓝色）；

第二步，肿瘤样本被运送到专有的GMP设施，在那里TIL被分离并繁殖，将不同种类的T淋巴细胞在细胞板上克隆化，并加入高浓度的IL-2来选择培养，在三周内产生数十亿TIL。

第三步，在IL-2的刺激下不同种类的T淋巴细胞都得到了克隆扩增，形成了细胞群；

第四步，用病人的肿瘤细胞和扩增后的T淋巴细胞反应，凡是能够发生杀瘤效应的T淋巴细胞群作为阳性TIL群留下（红色），其余的丢弃（绿色，深蓝色）；

第五步，用负载了肿瘤特异性抗原的树突状细胞（DC）进一步扩增培养肿瘤特异性的TIL；

第六步，患者开始一周的预处理治疗（清髓）以准备接受TIL.TIL产品作为一次性疗法施用，在TIL输注后立即接受多达6剂白细胞介素2（IL-2），来支持患者体内TIL的生长和激活。

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实体瘤和非实体瘤的区别在于：

一、肿瘤形态不同，实体瘤都会形成肿块，通过肉眼或者CT、磁共振等影像学检查方法可以看见。非实体瘤主要是造血系统肿瘤，其肿瘤细胞主要存在于血液循环中，肉眼或影像学检查不可见细胞，细胞涂片在显微镜下观察才可见，当肿瘤细胞侵犯骨头、淋巴结等部位时也可见到实体的病灶。

二、生长速度不同，实体瘤的生长速度慢于非实体瘤。

三、肿瘤分期方法不同，实体瘤的分期是根据肿瘤扩散的范围来分期，目前都采用国际上通用的TNM分期系统。非实体瘤不适合用TNM系统来分期，而且都不进行分期，只看血液中肿瘤细胞的比例。

四、治疗方法不同，实体瘤可采用手术、放疗、化疗以及免疫治疗、靶向治疗等方法，而非实体瘤以化疗为主，手术治疗几乎没有地位。

近两年声名大噪的的免疫疗法，很多人可能都已经知道PD-1和CAR-T，在治疗血液瘤（非实体瘤）方面的卓越功勋，但这只是冰山一角，在海面之下我们还有数量庞大的实体肿瘤需要人类克服。

基于T细胞的三大疗法--CAR-T,TCR-T,TILs 最近各大国际免疫团队在实体瘤中的研究成果也初现曙光。

在实体肿瘤中最具潜力的TILS（肿瘤浸润淋巴细胞）疗法LN-145已获得了FDA授予的突破性疗法称号，用于治疗化疗后复发的晚期宫颈癌患者，预计这款疗法将在近两年上市，最新消息表示 Iovance可以拿二期单臂数据申报晚期宫颈癌，LN-145一旦获批，这将成为实体肿瘤首款获批的过继性细胞免疫疗法。

肿瘤TILs疗法

TIL细胞疗法是由Rosenberg及其团队开创的方法。

Rosenberg是世界著名的癌症学和免疫学专家，也是美国癌症研究院（NCI）的外科主任。

Rosenberg认为，癌细胞入侵时，自身的免疫系统会试图打败体内蔓延的肿瘤。TIL--肿瘤浸润的淋巴细胞是做得最好的那部分免疫系统细胞。


Steven Rosenberg（NCI）TILs疗法与其他细胞免疫疗法有何不同？

和CAR-T一样，TILs属于过继性免疫治疗的一种，但是这是一种赶超CAR-T的新型实体瘤T细胞疗法。

Answer 1

1.识别杀伤能力更强

TIL的免疫细胞来自于肿瘤组织，其自然靶向该患者肿瘤特异性抗原。而其他细胞免疫疗法大部分来取自血液，这直接决定了免疫细胞识别肿瘤的能力。据估计，肿瘤里分离出的免疫细胞，有60%以上能识别肿瘤，而血液里面分离的免疫细胞，不到0.5%。

2.细胞培养过程不同

这种新型的疗法不是像传统的简单的扩增回输，而是要确定患者病例中特定的突变。之后利用突变信息找到能够最有效瞄准这些突变的T细胞，最后提取出专门患者肿瘤中细胞突变的T细胞，这些细胞具有精准识别癌细胞的能力。相比之下，CAR-T和TCR-T中用于治疗的T细胞是通过基因转染技术改造的外周血T细胞，是进行修饰而非筛选培养，因此，精准识别的能力与TIL细胞相差甚远。

3.扩增数量庞大

TILs细胞经过分离筛选后，会加入白细胞介素2进行培养，增加免疫细胞存活的几率，最大限度的扩增免疫细胞，达到数百亿~数千亿级别，确保T细胞的有效性和活性后重新注入到患者体内。同时，研究人员发现联合另一种“明星抗癌药”PD-1抑制剂Keytruda，Keytruda即属于另一种免疫疗法免疫检查点阻断，在某些癌症中有更加显著的效果。

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TIL治疗程序 图片来源 | Iovance官网TILs疗法在各类实体肿瘤中的临床表现▍黑色素瘤：

2009年Rosenberg教授发表的针对黑色素的三项连续的临床试验中，接受TILs治疗的客观缓解率在49％至72％之间。其中25名接受TILs疗法的试验中，有7名（28％）达到了完全缓解。其中一位患者在接受治疗的12天肿瘤就出现了迅速的缩小。

基于TILS细胞的创新型疗法LN-144(Lifileucel）更新了黑色素瘤的临床结果.

C-144-01是一项2期临床试验，招募66名已被诊断患有IIIc期或IV期转移性黑色素瘤的患者。这些患者的特点是至少接受了3~4种全身性治疗都失败后的患者，所有人都接受过PD-1抑制剂治疗，80%接受过CTLA-4抑制剂 ，23%的患者接受过BRAF / MEK抑制剂，还有44%的患者存在肝或脑转移，在临床上已经没有其他治疗方案。

这些患者在接受手术后，将肿瘤组织中的TIL细胞进行培养后回输，平均注入的TIL细胞：28 x 10^9；IL-2剂量：6次。


实验结果

66例接受过PD-1治疗再会输TIL之后，晚期黑色素瘤患者的试验中，结果显示：

疾病控制率（DCR）高达80.3％；

客观缓解率达到36.4%；

中位随访时间为8.8个月，未达到中位反应持续时间。

更引人注目的是，患有PD-L1阴性的患者也有响应，这说明对免疫检查点抑制剂无效的患者仍能获益于TIL疗法。

对于PD-1治疗后进展的患者，几乎没有其他治疗选择，这种治疗方案是不可替代的。


一位晚期黑色素瘤患者肿瘤在治疗前出现广泛转移，在接受TILs疗法后一个月病灶明显缩小，治疗6个月达到完全缓解，治疗两年后仍然处于完全缓解状态，并且体内持续存在肿瘤反应性CD8 + T细胞。


▍宫颈癌-首次获FDA突破

Iovance公司基于自体肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）研发的另一款针对其他实体肿瘤的疗法称为LN-145。

2019年6月，FDA基于innovaTIL-04（C-145-04）积极的试验的数据，治疗晚期宫颈癌患者的反应率（ORR）高达44％，授予肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）治疗方法LN-145为突破性的治疗指定，这是用于实体瘤的细胞免疫疗法首次获此殊荣。Iovance Biotherapeutics公司与FDA进行讨论之后宣布：FDA支持LN-145治疗晚期宫颈癌的监管申请。

第二阶段innovaTIL-04（C-145-04）积极的试验在2019年2月4日的数据截止时，有27名可评估的患者。平均注入的TIL细胞：28 x 109；IL-2剂量：6次。

结果显示：

客观缓解率（ORR）44%，完全缓解率（CR）11%，疾病控制率（DCR）高达85%。即12名的患者有效果，包括1名完全应答，9名部分应答和2个未确认的部分应答；
中位随访时间为3.5个月，12例患者中有11例持续应答；
没有任何严重的副作用发生。

一名患有转移性鳞状细胞癌并接受了多种联合化疗方案，包括顺铂，长春新碱和博来霉素，然后用吉西他滨加顺铂联合放疗。随后发现转移，包括主动脉旁，双侧肺门，颅下和髂骨部位（图1A和1C）。治疗后，她在所有疾病部位都完全消退（图1A和1C）。

另一患者患有转移性腺癌。她的原发性肿瘤对化放疗无效。随后转移到更多的腹膜后淋巴结和肝脏表面，在TIL治疗前，她在腹膜后，腹壁，旁系，肝旁和盆腔部位有肿瘤进展（图1B和1d）。在治疗后，出现完全的临床缓解（图1B和1d）。


在化疗期间或之后进展的宫颈癌患者的治疗选择有限，之前报道的晚期宫颈癌化疗或免疫治疗二线治疗的应答率仅在4％-14％之间。而这款新型的非常安全的细胞免疫疗法为晚期宫颈癌患者带来了44%的应答率，并且在一些患者中表现出持久的应答效果，研究人员表示这种治疗方式可以实现长期疾病控制的希望。希望这款疗法能尽快获批上市。

▍非小细胞肺癌

肺癌是全球发病和死亡最高的癌症，尽管近年来靶向和免疫治疗发展已经让肺癌越来越趋于慢性病的治疗，

由美国知名癌症中心莫菲特癌症研究中心（H. Lee Moffitt ）开展的基于TIL细胞治疗的Ⅰ期临床结果公布：

在12名可评估的非小细胞肺癌患者中，TIL疗法可达到25%的总缓解率，其中两名患者达到持久的完全缓解。


尽管这项研究规模很小，但还是令肿瘤学家们感到振奋，因为这些患者都是临床上已经接受过PD-1（Opdivo）治疗后病情又发生进展的晚期患者。

当从这些患者体内的肿瘤病灶中提取出抗癌能力超强的TILs细胞，并在体外扩增培养成数十亿有着精准杀伤能力的免疫大军，回输到体内作战时，大部分患者在首次TIL治疗后进行 CT扫描就开始出现明显的肿瘤消退。

这项试验共有32名患者参加，最终有16名患者接受TILS治疗，其中12名患者可以评估。在平均随访1.4年时，3名患者病情缓解，其中两名完全患者，并且已超过一年。另一名患者的缓解即将得到确认。


大部分患者在接受TILs治疗后，肿瘤病灶都有所缩小，在接受治疗后的第一次CT扫描时，肿瘤病灶直径平均缩小38%！

因此，在PD-1治疗后，TILs疗法仍具有令晚期转移性非小细胞肺癌达到持久缓解的能力，这是非常了不起的，期待这款疗法能加大研究，早日获批上市，为晚期患者的生命持续续航！

▍其他

目前，这款新型的免疫疗法暂未上市，但在全球范围内开展了多项针对各类实体肿瘤（非小细胞肺癌，结直肠癌，卵巢癌，黑色素瘤...)的临床试验。


结语

肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)可以利用和增强人体天然防线来高度个体化、特异和强效的抗肿瘤，TIL具有以下特点：

1)多克隆性，可以识别多种新生抗原，在异质性的黑色素瘤、宫颈癌、头颈癌和肺癌等实体瘤中有效；

2)个体化，高度特性

3)持久性；

4)输注后不需要额外维持治疗就可以形成免疫记忆。